美国队长史蒂夫·罗杰斯（克里斯·埃文斯 Chris Evans 饰）带领着全新组建的复仇者联盟，继续维护世界和平。然而，一次执行任务时联盟成员不小心造成大量平民伤亡，从而激发政治压力，政府决定通过一套监管系统来管理和领导复仇者联盟。联盟内部因此分裂为两派：一方由史蒂夫· 罗杰斯领导，他主张维护成员自由，在免受政府干扰的情况下保护世界；另一方则追随托尼·斯塔克（小罗伯特·唐尼 Robert Downey Jr. 饰），他令人意外地决定支持政府的监管和责任制体系。神秘莫测的巴基（塞巴斯蒂安·斯坦 Sebastian Stan 饰）似乎成为内战的关键人物……

渐渐习惯了现代生活的美国队长史蒂夫·罗杰斯（克里斯·埃文斯 Chris Evans 饰），在一次行动后隐隐嗅到神盾局内部所弥漫出来的凶险气味。而当得知神盾局正秘密进行的“洞察计划”后，他更为此感到愤怒。某天，神盾局指挥官尼克-法瑞（塞缪尔·杰克逊 Samuel L. Jackson 饰）遭到一群武装分子袭击，他拼尽全力将一支U盘交到美国队长手中，这里面藏着该局二战以来最重要且最可怕的秘密。在此之后，美国队长因涉嫌杀害尼克而遭到前局长亚历山大·皮尔斯（罗伯特·雷德福/Robert Redford 饰）的通缉和追杀，逃亡中他得到黑寡妇（斯嘉丽·约翰逊 Scarlett Johansson 饰）和退伍老兵“猎鹰”（安东尼·麦凯 Anthony Mackie 饰）的帮助。 他们必须争分夺秒解开神盾局的秘密，阻止“洞察计划”的施行…

本片由漫画改编而成。在二战时期，美国政府为了对付纳粹德国，特别研制出一种名为超级士兵的血清。这种血清能够提升士兵的体力、速度、耐...

剧情紧接上一部《钢铁侠与浩克：英雄集结》的结尾彩蛋。红骷髅意欲掌握超级士兵血清并夺取钢铁侠的装甲一举统治世界。这次，他找来了模仿大师做帮手。他们能否得偿所愿？

全集动画讲述的是蜘蛛侠和他的朋友们的恶搞动画。漫威漫画(Marvel Comics)是美国漫画公司两大巨头之一，创建于1939年，于1961年正式定名为Marvel。蜘蛛侠和他的惊奇盟友：神奇搞笑动画片是恶搞神奇漫画中所有英雄。