因父亲被害，14岁的玛蒂·罗斯（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 饰）抵达案发地史密斯堡，作为长女代表家人处理后事。杀死父亲的凶手汤姆·切尼已不知去向，在这枯燥又忙碌的西部小镇上，没人关心杀死异乡人的逃犯何时落网。玛蒂决定自己雇佣警察为父亲报仇，经人介绍，她选择与醉醺醺的警长罗斯特·考波恩（杰夫·布里吉斯 Jeff Bridges 饰）合作，同时，一名来自德克萨斯的骑警拉博夫（马特·达蒙 Matt Damon 饰）亦希望抓获汤姆·切尼，好在德州获得高额悬赏，为了让切尼在本地被正法，玛蒂必须在拉博夫之前抓到杀父仇人。成熟而坚强的玛蒂与罗斯特踏入了保留地，在那里有众多不法之徒，以及暂时逍遥法外的仇人……

塞博坦星内战如火如荼，在危机时刻，擎天柱将大黄蜂派往地球，等待重新建立基地的时机。此后，大黄蜂降落在1987年的加州，谁知不仅先遭到特工杰克·伯恩斯（约翰·塞纳 John Cena 饰）的围捕，更被尾随而来的霸天虎成员殴至重伤，失去了声音的同时还丧失了记忆。另一方面，正在叛逆期的少女查莉·沃特森（海莉·斯坦菲尔德 Hailee Steinfeld 饰）阴差阳错得到了变形成大众甲壳虫的大黄蜂，双方相互试探，进而成为亲密无间的好朋友，同时也闹出了不少的笑话。好景不长，霸天虎成员粉碎和反弹球追至地球，他们先是骗取美国政府的信任，通过卫星网络找到大黄蜂的踪迹，之后更企图将霸天虎大部队召唤到这里。 逐渐恢复记忆的大黄蜂，决心凭借一己之力保护新朋友和这个美丽的蓝色星球……

正就读中学的少年迈尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生奇特的变化。偶然机缘，他目睹了蜘蛛侠（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）和犯罪头目金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并帮助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程中，二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们合力与恶势力展开斗争……

影片讲述了新生代蜘蛛侠迈尔斯携手蜘蛛格温，穿越多元宇宙踏上更宏大的冒险征程的故事。面临每个蜘蛛侠都会失去至亲的宿命，迈尔斯誓言打破命运魔咒，找到属于自己的英雄之路。而这个决定和蜘蛛侠2099所领军的蜘蛛联盟产生了极大冲突，一场以一敌百的蜘蛛侠大内战即将拉响！

故事以漫威漫画人物少年迈尔斯·莫来莱斯为主角，讲述了这位少年在与强大邪恶势力斗争中不断成长，并最终成为蜘蛛侠群体中一员的故事，影片中多个时空多元宇宙平行时空的恢弘世界观令观众叹为观止，六位蜘蛛侠同框出镜更是史无前例。